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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)中的注意事項(xiàng)

原代培養(yǎng)的細(xì)胞，來源于胚胎、組織器官和外周血，通過特殊的分離方法制備，稱為原代細(xì)胞。初步分離得到的細(xì)胞具有與體內(nèi)細(xì)胞相似的生物學(xué)特性，是研究生進(jìn)行與物體相關(guān)的生命活動(dòng)的理想材料。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)是從體內(nèi)取出人/小鼠模型動(dòng)物特異性細(xì)胞，用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理，分散成單細(xì)胞，并在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得細(xì)胞能夠存活、生長(zhǎng)和繁殖的過程。原代培養(yǎng)是指細(xì)胞、組織和器官直接從體內(nèi)取出后立即進(jìn)行培養(yǎng)。此時(shí)的細(xì)胞保持了原細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，則仍保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，...

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原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)都有哪些抗污染措施？

成纖維細(xì)胞比心肌細(xì)胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細(xì)胞間中仍有少數(shù)成纖維細(xì)胞混雜，如果處理不當(dāng)，很容易長(zhǎng)成優(yōu)勢(shì)細(xì)胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細(xì)胞有絲分裂，因此BrdU常規(guī)用于抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。但如果用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象，獲得90%以上的心肌細(xì)胞。觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時(shí)，接種密度低，貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量減少。為了防止存活的心肌細(xì)胞隨著液體的更換而被丟棄，...

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細(xì)胞外泌體的組成都包括什么？

細(xì)胞外泌體是細(xì)胞分泌的大小約為30-150nm的納米物質(zhì)，是細(xì)胞外囊泡的一類，結(jié)構(gòu)類似于細(xì)胞，磷脂雙分子層表面具有多種特異性膜蛋白，內(nèi)部搭載著多種蛋白質(zhì)、RNA、DNA等重要生物信號(hào)物質(zhì)，廣泛分布于血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁、膽汁等各種體液中。外泌體的來源細(xì)胞種類非常豐富，幾乎在人體血液、尿液、母乳和唾液等多種體液中都能發(fā)現(xiàn)它的蹤跡。可傳遞包括DNA、RNA、miRNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)在內(nèi)的多種生物活性物質(zhì)，同時(shí)保護(hù)包裹的內(nèi)含物免受核酸酶和蛋白酶，以及外界壞境變化引起的降解...

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細(xì)胞增殖分析（CCK-8 法）

CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)CCK-8法靈敏度高、不使用有機(jī)溶劑、檢測(cè)迅速、重復(fù)性好價(jià)格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價(jià)格便宜操作步驟較多，需要使用有機(jī)試劑，靈敏度不如CCK-8，多數(shù)需要配制，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，細(xì)胞毒性較高一、原理：CCK-8是MTT的升級(jí)產(chǎn)品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧...

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從肝臟組織中制備細(xì)胞核

一、材料與儀器：大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機(jī)、組織研磨器二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網(wǎng)織紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（RSB）②0.25mol/L蔗糖（超級(jí)純）③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加）濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RS...

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從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織分離DNA

材料與儀器：細(xì)胞、TBS抽提緩沖液、離心管實(shí)驗(yàn)步驟：步驟1：根據(jù)樣品類型，從下列方法中選一個(gè)作為步驟1進(jìn)行操作。(1)細(xì)胞樣品①單層培養(yǎng)的細(xì)胞以用冰預(yù)冷的TBS將單層細(xì)胞洗滌2次，用刮棒把細(xì)胞刮入約0.5ml的TBS中，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到冰浴的離心管中，用1mlTBS沖洗培養(yǎng)皿，并入離心管中的細(xì)胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細(xì)胞。用5~10倍體積經(jīng)冰預(yù)冷的TBS重懸細(xì)胞并再度離心。用TE(pH8.0）重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度為5x107細(xì)胞/ml，轉(zhuǎn)移至一個(gè)三角燒瓶中...

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細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)方法原理：細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的基本原理是慢凍快解凍，已被證明能最大限度地提高細(xì)胞活力。目前常用甘油或二甲基亞砜作為細(xì)胞低溫保存的保護(hù)劑。這兩種物質(zhì)可以提高細(xì)胞膜對(duì)水的滲透性，再加上緩慢的冷凍可以使細(xì)胞內(nèi)的水從細(xì)胞中滲出，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶形成對(duì)細(xì)胞的損傷。復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)應(yīng)采用快速熔融的方法，以保證細(xì)胞外晶體在短時(shí)間內(nèi)熔融，以避免因水緩慢熔融進(jìn)入細(xì)胞形成細(xì)胞內(nèi)重結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成損傷。實(shí)驗(yàn)材料：細(xì)胞試劑、試劑盒：D-Hanks液、小牛血清、培養(yǎng)液、青霉素、鏈霉素、胰蛋...

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標(biāo)記細(xì)胞株要如何保存？

細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細(xì)胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間...

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